Prion protein detection via direct immuno-quantitative real-time PCR

Reuter, T.R., Gilroyed, B.H., Alexander, T.W., Balachandran, A., Czub, S., et McAllister, T.A. (2009). « Prion protein detection via direct immuno-quantitative real-time PCR. », Journal of Microbiological Methods, 78(3), p. 307-311. doi : 10.1016/j.mimet.2009.07.001  Accès au texte intégral (en anglais seulement)

Résumé

Nous décrivons une épreuve simple et robuste servant à la détection quantitative des prions à l’aide de la PCR en temps réel quantitative (iQ-RT-PCR) grâce à la conjugaison directe d’un anticorps dirigé spécifiquement contre le prion (ICSM35) et d’une queue d’ADN synthétique de 99 pb. La queue d’ADN a été synthétisée de manière à contenir un seul site de restriction ScrFI, ce qui permet d’utiliser la PCR en temps réel pour mesurer quantitativement les queues d’ADN coupées par l’enzyme de restriction. L’épreuve a été vérifiée au moyen de prions de la tremblante fixés à des membranes de difluorure de polyvinylidène et à des plaques 96 puits revêtues d’un anticorps de capture provenant d’une épreuve immunoenzymatique commerciale (TeSeE). La limite de détection de l’épreuve iQ-RT-PCR correspondait à 2,32 × 10² épitopes du prion, ce qui représente une sensibilité 1000 fois plus élevée que celle de l’épreuve commerciale. La détection des prions à partir d’homogénats d’encéphale d’animaux atteints de la tremblante dilués liés à des membranes était linéaire sur une plage de 1,06 × 10⁴ à 3,24 × 10² épitopes (R² = 0,92). La sensibilité et la polyvalence de cette épreuve permettent une détection rapide et fiable des agents responsables des encéphalopathies spongiformes transmissibles.