Visualizing double-stranded RNA distribution and dynamics in living cells by dsRNA binding-dependent fluorescence complementation.

Cheng, X., Deng, P., Cui, H., et Wang, A.M. (2015). « Visualizing double-stranded RNA distribution and dynamics in living cells by dsRNA binding-dependent fluorescence complementation. », Virology, 485(Article number 7888), p. 439-451. doi : 10.1016/j.virol.2015.08.023  Accès au texte intégral (en anglais seulement)

Résumé

Les ARN bicaténaires (ARNds, pour double-stranded) sont un type important d’ARN qui jouent des rôles essentiels dans différents processus cellulaires chez les eucaryotes et qui sont caractéristiques des infections par des virus à ARN de polarité positive. À l’heure actuelle, il n’existe aucune technologie in vivo permettant de visualiser les ARNds dans les cellules vivantes. Nous présentons ici une épreuve de complémentation fluorescente qui révèle la présence d’ARNds et qui peut servir à surveiller la distribution et la dynamique de l’ARNds in vivo. Le système comprend deux protéines de liaison à l’ARNds qui sont fusionnées aux moitiés N-terminale et C‑terminale de la protéine jaune fluorescente (YFP, pour yellow fluorescent protein). La liaison des deux protéines de fusion à un même ARNds permet d’approcher suffisamment les deux moitiés de YFP pour restaurer la fluorescence. Avec cette technique, nous avons pu visualiser, dans des cellules vivantes, la distribution et le transport des ARN intermédiaires dans la réplication des virus à ARN de polarité positive.

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